超滤作为一种膜分离技术,普遍应用于生物样品的浓缩、脱盐和缓冲液置换,其原理是溶液在力的作用下,通过超滤膜孔径的筛滤,大分子量的颗粒被截留下来,而水、溶剂和低分子量溶质则允许透过膜,从而达到浓缩、脱盐和缓冲液置换的目的,这种方法较大的特点是操作简便、快速、高效,可同时浓缩和纯化分子,一般来说超滤的回收率能够达到90%以上,因此得到许多人的青睐。超滤浓缩器是一种可以为蛋白质样本的浓缩和缓冲交换提供可靠准确结果的一次性超滤离心式过滤装置,与层析、透析等方法相比,超滤对被处理的分子更加温和,不需要有机萃取,不会导致蛋白变性,且简单高效。洁特6mL规格超滤浓缩器可处理体积4mL以内的样本,离心管内包含一个内置竖直的聚醚砜(PES)膜过滤装置,聚醚砜膜具备低蛋白附着、高通量的特点,可应用在3KD、5KD、10KD、30KD、50KD、100KD六种不同的截留分子量中。截留分子量标识和体积刻度蚀刻在浓缩器的侧面便于识别。超滤离心管通常具有不同材质的选择,以适应不同化学环境下的使用需求。青岛离心管使用方法
可以通过多个超滤管同时超滤来降低浓度,而后者通过改变不同的缓冲液直到没有蛋白质沉淀。用来浓缩蛋白质的。如果要更换缓冲液,当总蛋白溶液浓缩到1毫升左右时,轻轻添加一个新的缓冲液〈用0.22um超滤膜超滤后〉,然后连续浓缩到1毫升左右。浓缩液的之后体积取决于所需的蛋白质浓度,通常不超过500 ul,但也要浓缩到200 ul以下。根据每次至少10次的体积浓度计算,1000次以上的3次基本可以达到更换缓冲器的目的。提取之后浓缩蛋白的操作在冰上进行。黄色设备头(200ul)用于提取之后的蛋白质浓缩物。设备头沿设备头边缘轻轻插入。将蛋白溶液轻轻吹匀。注意不要触摸超滤膜。吸取浓缩液,一次较多吸200 ul,直至耗尽。之后留在管底的浓缩液不需要吸收,否则太困难,可能损坏超滤膜。之后,在无超滤膜的超滤管中加入milliq水,以防止超滤膜干燥。广东再生纤维素离心管推荐超滤离心管利用离心力和超滤膜将分子分离和过滤出来。
超滤离心管使用注意事项:(1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。2)新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。(3)平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至较低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
一般来说,我们较常用的离心管就是塑料离心管,塑料离心管的优缺点也很明显,优点是它的硬度较小,可以利用穿刺法来得到我们需要的物质。但这也正是它的缺点,因为硬度小,所以它也更容易变形,抗腐蚀性也差,所以它的寿命是比较短的。塑料离心管的还可以按照材质来选择,分别有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)这三种材质。一般大规模的实验室都是将塑料离心管做一次性使用,但一般的实验室还是会循环使用,不推荐循环使用,因为这样会造成实验结果的不准确性,但如果非要做循环使用的话小编还是建议使用pp材质的离心管,然后经过高压高温进行消毒,pp材质是上述三种材质中较好的,所以在选择的时候我们尽量选择pp材质的离心管。超滤离心管在食品安全监测中也具有重要意义,如检测水产品中的重金属等有害物质。
超滤离心管使用注意事项:当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。超滤离心管通常被用于生物医学、制药、食品科学等领域中。上海高离心力离心管选择
超滤离心管还可以用于提取DNA、RNA等核酸分子,并在基因工程和生物技术中发挥重要作用。青岛离心管使用方法
超滤离心管使用方法和注意事项:1、选择合适的超滤离心管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤离心管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤离心管。2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤离心管需要插在冰上预冷。3、质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法*时间处理,后果不可预测!青岛离心管使用方法