厦门药理学膜片钳成像应用

膜片钳使用的注意事项：1.向玻璃微电极灌注内液时切勿灌太多（1cm左右为适），以防液体进入银丝底部增加噪声。2.安装玻璃微电极时，电极应与银丝平行，防止刮蹭银丝电极。3.玻璃微电极需先用甲醇浸泡，再用酒精灯微烧两端，使其平滑。4.换液时应时刻观察浴槽，防止液面过低或液体溢出污染镜头，很适液面为微高于出液口。5.浴槽及灌流系统用毕请及时清洗，防止长菌影响实验。6.打雷天气必须禁止膜片钳实验。7.干燥季节请先用手触摸金属框架释放身体的静电。8.每位实验者请在E盘建立自己的文件夹储存数据。全自动膜片钳系统技术指标：药物消耗极低。每次更换的外液只需十几微升。厦门药理学膜片钳成像应用

膜片钳技术操作方法：实验前准备:打开总电源及稳压电源，打开电脑、放大器，并开启程序软件，新建数据文档并准备开始试验;用P97微电极拉制仪拉制玻璃电极若干备用;检查减震台的减震效果，打开倒置显微镜，监视器和微操备用，取-血细胞将其中玻片取出放入小培美血中，置于倒置显微镜下，于低倍镜下寻找状态良好的细胞，并转入高倍镜下再次确认细胞状态及贴壁情况等，确认细胞后，取电极一根充灌电极内液，弹出气泡，然后套入银丝并插入探头中扭紧旋钮，用注射器管道给电极一点点正压，将电极入水，入水后，查案入水电阻，要在4-8M左右的电极才可以使用，通过调节微操，使电极不断向下接近细胞，待电极尖锐端逐渐变清晰并且将要接近细胞时停止向下，然后把电极移到细胞上方调节放大器上的调零旋钮以保证基线在零水平。连云港神经生物学膜片钳供应商膜片钳使用操作注意：拉制仪提前预热（至少30min）。且用完及时关闭。

膜片钳系统有如下应用局限性(1)光能应用于悬浮细胞的纪录，因此大部分的纪录对象为化细胞，而对于需要贴壁生长的大多数正常细胞，现有的自动膜片钳系统就无法纪录；(2)在纪录对象上，目前的膜片钳系统只能纪录胞膜形状平整饱满的细胞，大部分是工具细胞如化细胞，此类细胞有比较强的细胞膜可以禁得起各种人为操作，而许多具有研究价值的细胞(例如元代培养的神经元)胞膜较弱容易破裂，且胞体表面不规整，现有的自动膜片钳系统难以派上用场。

全自动膜片钳系统技术指标：1）操作简单，全过程可自动化。2）实验迅速，通量高。一般每天可达到50个实验数据左右。3）药液交换迅速。细胞内、外液的交换是在平面芯片上进行，所以药液交换非常迅速，作用时间快，外灌流时间常数：~200ms内灌流时间常数：~2s。4）药物消耗极低。每次更换的外液只需十几微升。5）信号准确，噪声少。使用了先进的微型“法拉第板”替代传统的“法拉第笼”，极大的减少了噪声源，记录数据的电噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6）扩展功能多。配套扩展设备丰富，如内灌流系统、温度控制系统、脂质体制备器等等。7）软件强大。软件的功能全部，可按照操作者设定的参数方案自动执行实验，进行细胞吸附、封接和维持全细胞记录模式；并兼容常规膜片钳放大。膜片钳使用操作注意：封接范围内细胞膜光有少数离子通道。

膜片钳技术发展至今，已经成为现代细胞电生理的常规方法，它不只可以作为基础生物医学研究的工具，而且直接或间接为临床医学研究服务，目前膜片钳技术普遍应用于神经（脑）科学、心血管科学、药理学、细胞生物学、病理生理学、中医药学、植物细胞生理学、运动生理等多学科领域研究。随着全自动膜片钳技术（Automaticpatchclamptechnology）的出现，膜片钳技术因其具有的自动化、高通量特性，在药物研发、药物筛选中显示了强劲的生命力。膜片钳的数据如何处理：通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡。苏州医学膜片钳全细胞记录技术

膜片钳技术的应用范围：膜片钳技术在通道中的研究。厦门药理学膜片钳成像应用

膜片钳技术之全细胞记录的优点：与传统的细胞内记录相比，全细胞记录也有很多好处，比如电极尖锐端开口较大，电阻只2~20MΩ，易于进行电压/电流钳制，噪声很大程度下降，电极电压降也变得很小，补偿非常容易。与单通道记录相比，单通道记录无法获得整个细胞的功能变化信息，而全细胞记录（尤其是脑片或在体记录）所获信息则能反映细胞功能（甚至细胞之间信息传递）的改变，加之易于更换细胞外液，所以，全细胞记录更适用于对离子通道的药理学研究，即加各种通道blocker啦，激动剂啦之类的。厦门药理学膜片钳成像应用

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