扫描电镜细胞内部结构冷冻割断法 该方法简便,结构清晰,已得到普遍应用。其操作方法如下: 1) 取材和固定:为了使细胞结构清晰,不被过多的血细胞污染,可在取材前用灌注法冲洗。即先将动物麻醉,经腹主动脉注入生理盐水或低分子量的右,切开下腔静脉放血,至无血色为止。然后迅速取材,将样品修成1mm×1mm×5mm大小,投入1%锇酸溶液中固定1小时,用1/15M磷酸缓冲液(pH7.4)清洗两次,每次10分钟。 2) 二甲基亚砜浸泡:将样品依次放入25%、50%二甲基亚砜溶液中,各浸泡30分钟。 3) 割断:用TF—1型冷冻割断装置进行割断。然后将割断后的样品放到50%二甲基亚砜中,等融化后再用1/15M磷酸缓冲液浸洗,每次10分钟,换液5次。 4) 软化及后固定:将样品放入0.1%锇酸中软化,温度20℃,时间48~72小时。然后用1%锇酸固定1小时,双蒸水浸洗1小时,换液几次,需彻底清洗干净。 5) 导电染色:将样品放入2%丹宁酸中2小时(或过夜),以双蒸水清洗1小时,换液几次。双蒸水清洗1小时。 6) 脱水、干燥及镀膜:按常规方法进行。扫描电镜样品制备过程简单,不用切成薄片。细胞扫描电镜推荐
在扫描电镜中,入射电子束在样品上的扫描和显像管中电子束在荧光屏上的扫描是用一个共同的扫描发生器控制的。这样就保证了入射电子束的扫描和显像管中电子束的扫描完全同步,保证了样品上的“物点”与荧光屏上的“象点”在时间和空间上一一对应,称其为“同步扫描”。一般扫描图象是由近100万个与物点一一对应的图象单元构成的,正因为如此,才使得扫描电镜除能显示一般的形貌外,还能将样品局部范围内的化学元素、光、电、磁等性质的差异以二维图象形式显示。内蒙古整体扫描电镜扫描电子显微镜、 或扫描电镜,是强大的显微镜用电子来形成图像。
扫描电镜在材料学的应用 扫描电镜技术在材料学的应用十分普遍,比如以下几个方面: 1)用于高分子多相体系的形态结构,界面状况损伤性能预测等方面的研究; 2)用于研究高分子复合材料微观形态; 3)用于分析磨料与金属表面的相互作用过程; 4)用扫描电镜及其动态拉伸台对高碳钢中碳钢进行动态拉伸试验,观察高碳钢、中碳钢裂纹的萌生、扩展及断裂过程。扫描电镜在物理学的应用 在物理学中,扫描电镜可用于观测导电粉的粒径分布、导电粉在导电点中的浓度和分析导电点缺陷,以提高液晶显示器的产品质量,用于也可观测衬垫料的粒径分布、 控制液晶显示器的盒厚均匀程度、消除液晶显示器的底色差异,所得图像可为从事液晶显示器研制的工程技术人员提供清的材料图像,为排除衬垫料的不均匀因素所造 成的液晶屏的质量问题提供依据。
和透射电镜相比,扫描电镜试样制备比较简单。在保持材料原始形状情况下,可以直接观察和研究试样表面形貌及其它物理效应(特征),这是扫描电镜的一个突出优点。扫描电镜的有关制样技术是以透射电镜、光学显微镜及电子探针X射线显微分析制样技术为基础发展起来的,有些方面还兼具透射电镜制样技术,所用设备也基本相同。但因扫描电镜有其本身的特点和观察条件,只简单地引用已有的制样方法是不够的。在进行扫描电镜观察时,如试样表面不导电或导电性不好,将产生电荷积累和放电,使得入射电子束偏离正常路径,较为终造成图像不清晰乃至无法观察和照相。扫描电子显微镜正是根据上述不同信息产生的机理,采用不同的信息检测器,使选择检测得以实现。
扫描电镜操作基本步骤 1 、取材 扫描电镜下观察的样品尺寸要求比较宽松,一般1cm3左右样品都能适合大多数扫描电镜观察。 2 、固定 铺片培养的细胞取出浸入 PBS 中,漂洗细胞表面。然后将细胞铺片放入青霉素小瓶中,加 4 ℃ 预冷的 3% 戊二醛,在 4 ℃ 固定 2h 或过夜,吸出固定剂,用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min ,再用 4 ℃ 预冷的 1% 锇酸。在 4 ℃ 固定 1h ,然后用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min 。 3 、脱水 acetone / 醋酸异戊酯( 1 : 1 )脱水 10min ,接下来醋酸异戊酯脱水 30min ,或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脱水,每种浓度酒精通过 2 次,每次 15min 。 扫描电镜能同时分析形貌和成分,可用于形貌观察、显微结构分析、微区成分分析、断口形貌和成分分布分析等。内蒙古整体扫描电镜
扫描电镜是一种多功能的仪器、具有很多优越的性能、是用途较为广的一种仪器。细胞扫描电镜推荐
扫描电镜以观察样品的表面形态为主。扫描电镜样品的制备,必须满足以下要求: ①保持完好的组织和细胞形态; ②充分暴露欲观察的部位; ③良好的导电性和较高的二次电子产额; ④保持充分干燥的状态。 某些含水量低且不易变形的生物材料,可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察,如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等,但图像质量差,而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料,则应首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥,然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。扫描电镜生物样品制备技术 常规扫描电镜对样品要求:必须是干燥的,不含水分或挥发性物质;具有一定机械强度,能耐受电子束轰击;具有导电性,被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点:含水分多,质地柔软,机械强度小;组成元素的原子序数低,导电性差,激发后二次电子的产额较少。制样的任务:通过一系列处理,既要尽量完美地保存材料的固有形态,又要改良其物理性能,使其适合在电镜下观察成像 以下即为步骤方法、所需注意项目、以及操作中的使用技巧。细胞扫描电镜推荐
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