北京CD63外泌体慢病毒

PEG沉淀法分离外泌体：通常通过将无水聚合物，如聚乙二醇（PEG），与样品混合来沉淀外泌体。PEG聚合物竞争性结合水分子，增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力从而沉淀外泌体，然后通过离心分离外泌体。这种分离的方法快速，简便，可用于各种起始体积（从100μL到几毫升）适合于各种研究和临床设定。然而，这种方法缺乏选择性，PEG聚合物不只会导致外泌体小泡沉淀，还会引起其他细胞外囊泡、细胞外蛋白质和蛋白质聚集体沉淀。因此，在使用这种方法之前，必须进行样品预处理，例如过滤或超速离心，以减少较终的外泌体制剂的污染。外泌体发挥功能方式：细胞-细胞之间的通讯，譬如抗原递呈，这是发挥功能的主要方式。北京CD63外泌体慢病毒

细胞外小泡通过充当脂肪组织、肝脏、骨骼肌和免疫细胞之间的细胞间通讯方式，在肥胖及其代谢并发症的发展中发挥作用。外泌体可能在外周胰岛素敏感性的调节中起作用，外周胰岛素敏感性是T2D发病机理的主要组成部分。外泌体似乎通过至少两种不同的机制来调节胰岛素敏感性，即通过调节炎症或通过与胰岛素反应性部位的直接相互作用。后者可通过与主要胰岛素信号分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信号通路）相互作用而影响胰岛素信号通路而直接或间接发生。与对照组相比，糖尿病患者的血浆EV含量更高，并且与对照组相比，糖尿病小鼠的血浆外泌体数量也更高。然而，确定外泌体的作用及其在肝/肠轴通讯中的潜在作用将需要对它们的组成有更好的了解，特别是饮食是否会改变肠源性外泌体的含量，因此就胰岛素反应而言它们的生物学功能尚未研究。北京CD63外泌体慢病毒基于外泌体的液体活检在病症和其他疾病的诊断和确定预后方面具有潜在的应用价值。

外泌体病毒传染：外泌体可以限制或促进病毒传染。如IFNα或APOBEC3G等外泌体载体可通过限制病毒复制或增强抗病毒免疫来阻止传染。病毒也可以劫持外泌体的生物发生机制来促进病毒的传播。外泌体可以作为一个假包膜，通过四聚体蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互作用增强病毒进入受体细胞，并帮助逃避抗病毒免疫。病毒组分(蛋白质和miRNA)的共转运也可能增强传染性。外泌体介导的病毒转移可能参与了病毒的遗传协同和多重传染.(CMV,巨细胞病毒；HSV-1,1型疱疹病毒)。

外泌体是分泌的细胞外囊泡的主要群体，是具有生物活性的脂双层囊泡，大小约为30-100nm，由不同类型的正常细胞和瘤子细胞自然产生和释放。这些囊泡在细胞间通讯中起重要作用，并影响细胞外环境和免疫系统反应。外泌体通过内体途径分泌到细胞外空间，并将各种生物活性分子（货物）转运至靶细胞。外泌体货物的组成非常多样化，包括各种免疫阻止和免疫刺激蛋白、趋化因子、细胞因子、细胞受体、脂质以及不同的核酸，例如miRNA和环状RNA。一个推测的作用是外泌体可能从细胞中去除多余和/或不必要的成分以维持细胞内环境的稳定。

外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是目前外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。外泌体作为核酸的药物递送载体。牛奶 外泌体

采用电子显微镜检测外泌体时对样品的预处理和制备要求较高，外泌体的提取方法和品质会对电镜结果造成影响。北京CD63外泌体慢病毒

酶联免疫吸附测定（ELISA）：将其中一种针对外泌体表面抗原的抗体固定在微孔板的表面上，将外泌体样品暴露于含有固定抗体的孔中，由于抗体-抗原相互作用，表达抗原的外泌体将被捕获固定在板上。将未捕获的样品内容物洗掉，并使用另一种抗体检测固定的外泌体。ELISA已用于从尿液、血浆和血清中分离出外泌体，当使用标准液（已知外泌体的量）创建标准曲线时，甚至可以进行定量。但是，此方法需要通过超速离心或超滤对样品进行预处理。同样，流场-流分离与紫外线分析仪和光散射检测器相结合已被用于分析外泌体的大小和纯度。外泌体属于胞外囊泡类，除了外泌体之外细胞还分泌微泡以及其它的膜囊泡。北京CD63外泌体慢病毒

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