血液外泌体粒径检测

外泌体是分泌的细胞外囊泡的主要群体，是具有生物活性的脂双层囊泡，大小约为30-100nm，由不同类型的正常细胞和瘤子细胞自然产生和释放。这些囊泡在细胞间通讯中起重要作用，并影响细胞外环境和免疫系统反应。外泌体通过内体途径分泌到细胞外空间，并将各种生物活性分子（货物）转运至靶细胞。外泌体货物的组成非常多样化，包括各种免疫阻止和免疫刺激蛋白、趋化因子、细胞因子、细胞受体、脂质以及不同的核酸，例如miRNA和环状RNA。超离法是较常用的外泌体纯化手段。血液外泌体粒径检测

外泌体与免疫反应、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中枢的神经系统相关疾病和病症进展相关。由外泌体传递到受体细胞的蛋白质、代谢物和核酸有效地改变了它们的生物反应。这种外泌体介导的反应可以促进或阻止疾病。外泌体在调节复杂的细胞内通路方面的固有特性使其在许多疾病的诊疗控制方面具有潜在的用途，主要包括神经退行性疾病和病症。外泌体可被设计用于递送不同的诊疗有效载荷，包括短干扰、反义寡核苷酸、化疗药物和免疫调节剂，并具有将其递送到预期目标的能力。合成galnac核酸方法超速离心法，这是目前外泌体提取较常用的方法。

NTA技术已被作为外泌体表征手段之一，相较于其他表征方式NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。大致方法是：将分离的外泌体样本注入纳米颗粒追踪分析仪，用激光光束穿过样本，激光在腔室内与颗粒相互作用时会发生散射，通过装有摄像头的显微镜收集散射光，捕捉外泌体的布朗运动，实现颗粒可视化。然后使用Stokes-Einstein方程来测量粒子的平均速度，继而估算粒子的大小。NTA能够测量粒径10-1000nm之间的颗粒，包含了外泌体50-150nm的径粒范围，但是NTA鉴定需要大于0.5毫升的样品体积以及优化的数据收集和分析参数，另外，NTA比较难区分与外泌体具有相似布朗运动的蛋白质聚集体，因此无法排除其他物质干扰。

外泌体的生物发生和鉴定。液体和细胞外成分，如蛋白质、脂类、代谢物、小分子和离子，可以通过内吞作用和质膜内陷，与细胞表面蛋白一起进入细胞。由此产生的胞腔侧质膜芽的形成表现为质膜的外-内取向。这一出芽过程导致芽的形成可能与内质网、跨高尔基网络(TGN)和线粒体预先形成的早期核内体融合。ESEs也可以与ER和TGN融合，这可能解释了内吞物如何到达它们的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌体表面蛋白包括四聚体蛋白、整合蛋白、免疫调节蛋白等。外泌体可以包含不同类型的细胞表面蛋白、细胞内蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代谢物。外泌体的提取的方式：PS亲和法。

外泌体的提取分离方法：1、超滤离心：由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体，大于一般蛋白质，利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离，便可获得外泌体。超滤离心法简单高效，且不影响外泌体的生物活性，是提取细胞外泌体的一种新方法。2、磁珠免疫法：外泌体表面有其特异性标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体，通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成。外泌体,纳米颗粒

外泌体的提取分离方法：PEG-base沉淀法。血液外泌体粒径检测

为什么超速离心提取外泌体看不到沉淀？答：这种问题通常有三种可能性，其一：使用的细胞上清或者血清量太低，从而造成了这样的结果。其二：使用了不透明的超速离心管，一般来说外泌体产量都比较小，所以凡是不透明的管子，基本都是比较难见到明显沉淀的，可以当做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角转。部分品牌离心机的角转管壁粘附性比较低，超离结束没多久沉淀就会滑落下去，所以请在离心结束时赶紧去收样。外泌体的角色：1、外泌体发挥功能并一定需要受体细胞摄入外泌体：外泌体的膜蛋白有可能与细胞膜蛋白作用，活跃细胞内通路。2、外泌体的角色之一：细胞-细胞通讯，比如抗原递呈。血液外泌体粒径检测

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