当外泌体在1980年初次被发现后,其被认为是细胞排泄废物的一种方式,如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肉瘤侵袭等方方面面。有研究表明肉瘤来源的外泌体参与到肉瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了肉瘤的生长与侵袭。外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体,通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成。河南外泌体摄取
近年来,外泌体的捕获技术越来越多,微流体系也被用于外泌体提取,此方法能根据其物理和生化特性同时分离外泌体。采用这种方法获得的样品纯度高,且可及时获取外泌体用于疾病的相关检测。在初次注射时外泌体粘附在微流控设备的内表面,并在随后的PBS注射中冲洗掉。此方法采用的设备复杂,所需的样本量取决于流动通道的长度。另外,样品量的注入速率比较低,因此,对于大样品量,将需要较长的处理时间。外泌体在包括瘤子在内的各种疾病的发病机理中具有重要的功能。目前,研究人员已经开发了多种方法来分离外泌体,离心技术仍然是常用方法,其他方法,例如过滤、磁珠分离和色谱法等,也显示出独特的优势,但目前仍然没有一种公认有效的提取方法,研究人员应针对不同来源的样本以及不同的下游分析选取较适宜的提取方案。外泌体与细胞外囊泡1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现。
外泌体是包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30–150nm),由所有体外和体内细胞持续分泌。由于人体内复杂的功能,包括细胞间通讯和信号转导,外泌体正在改变研究。这些细胞外囊泡正在生长,这既是为了了解其生物学功能,也是为了将其用于实际应用,如无创诊断和高级调理开发。Dynabeads提供一系列外泌体分离产品和工具,用于表征和分析其RNA和蛋白质含量,以及体外和体内追踪,以帮助您进一步了解这些迷人的外泌体。超速离心方案可能冗长乏味且耗时的。您可使用灵活且可扩展的总外泌体分离试剂从细胞培养基或任何体液中即刻分离完整的外泌体。这些试剂及其随附的方案是多种试验的理想选择,包括处理少量样本和处理多个样本。
密度梯度离心法根据在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度将外泌体分成特定的层,目前普遍应用的是蔗糖,这种方法可以成功地将亚细胞成分(例如过氧化物酶体,线粒体和核内体)分离到密度梯度溶液中的不同层中。样品被放置在梯度的顶部,当施加离心力时,样品中的颗粒以独特的速率通过梯度,该梯度以从上到下的密度增加。样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度范围富集,随后可以通过分馏收集,密度梯度超速离心对从蛋白质聚集体和非膜颗粒中分离出外泌体非常有效。此方法获得的外泌体纯度较高,但步骤繁琐、费时且会造成外泌体损失。免疫印迹或蛋白质印迹是分析外泌体较常用的方法之一,其原理是外泌体上特异性抗原与抗体结合。外泌体是其中一类小囊泡,直径为30~150nm,密度1.10~1.18g/ml。
外泌体发现于1986年,是一种直径约30~100nm的双层膜囊泡状结构小体,可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肉瘤细胞等主动分泌产生,普遍分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。外泌体携带大量特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质,在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理过程,与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能,使得它具有潜在的应用价值,一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标,另一方面也可以作为诊疗手段,未来有可能作为药物的天然载体用于临床诊疗。外泌体分离之后,需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。体液提取试剂盒分类
基于外泌体的液体活检在病症和其他疾病的诊断和确定预后方面具有潜在的应用价值。河南外泌体摄取
外泌体的相关成分:1、外泌体的膜同细胞一样,是磷脂双分子层。2、外泌体膜含有MHC-1/2蛋白,能绑定特异性的肽链。3、外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流动,参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能。6、外泌体中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中。7、与外泌体产生相关的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物质进行外泌体中是特异性的:如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列(GGAG/CCCU),进行主动包埋。超速离心是目前分离外泌体的主要技术。河南外泌体摄取
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