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外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为诊疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床诊疗。外泌体研究，应选用血浆还是血清？答：血清是血液凝固之后收集的液体，所以其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了比较多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。外泌体可以通过多种方法给药，静脉内给药是较常用的途径。干细胞外泌体Dir

酶联免疫吸附测定（ELISA）：将其中一种针对外泌体表面抗原的抗体固定在微孔板的表面上，将外泌体样品暴露于含有固定抗体的孔中，由于抗体-抗原相互作用，表达抗原的外泌体将被捕获固定在板上。将未捕获的样品内容物洗掉，并使用另一种抗体检测固定的外泌体。ELISA已用于从尿液、血浆和血清中分离出外泌体，当使用标准液（已知外泌体的量）创建标准曲线时，甚至可以进行定量。但是，此方法需要通过超速离心或超滤对样品进行预处理。同样，流场-流分离与紫外线分析仪和光散射检测器相结合已被用于分析外泌体的大小和纯度。外泌体属于胞外囊泡类，除了外泌体之外细胞还分泌微泡以及其它的膜囊泡。海洋生物外泌体外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。

流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌体定量检测的准确性也在不断上升。将外泌体表面特异性标志物CD63、CD81等相应抗体进行标记，可用流式细胞仪检测到阳性表达，从而实现对外泌体的定量。但流式细胞技术检测时需要单颗粒悬浮液，当外泌体浓度高或分离过程中发生外泌体囊泡聚集时将导致一次观察到多个颗粒，从而导致数据不准确。因此，为了通过流式细胞仪观察，需要将外泌体通过免疫捕获或共价结合固定在磁珠表面上，从而便于将外泌体囊泡暴露于已知或者预期在外泌体表面表达的抗原的荧光偶联抗体中。在流式细胞术之前，可以在落射荧光显微镜（EPI）下观察与磁珠和荧光抗体偶联的外泌体囊泡。当样品通过流式细胞仪时采集荧光信号，不只可以对外泌体进行高通量分析，还可以基于抗原表达对外泌体进行定量或分类。外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶家族的一种。

血浆中的外泌体蛋白既可以当作标志物，也可以进行机理研究？首先，研究人员将慢性淋巴瘤（CLL）患者分为2个亚组：疾病进展期和疾病慢性期。然后利用质谱技术分析了患者血浆外泌体蛋白组，发现S100-A9蛋白在进展期CLL患者中明显高表达，可以作为CLL进展期诊断的辅助标志物。进一步，研究人员通过生信分析发现进展期CLL患者外泌体中的高表达蛋白质主要与炎症和氧化应激有关，而NF-κB通路正是承接此效应的关键通路。通过从进展期CLL患者中分离富含S100-A9蛋白的外泌体加入CLL患者的PBMC细胞中，证实了S100-A9+外泌体能够明显促进进展期CLL患者PBMC细胞中IκBα蛋白的磷酸化上调，进一步活跃NF-κB通路。研究证通过血浆外泌体蛋白组分析不只找到辅助诊断进展期CLL的标志物，并证实了S100-A9+外泌体可通过形成正向反馈调控，不断活跃进展期CLL患者自身PBMC细胞中的NF-κB通路，促进CLL进展的特殊机理。随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及瘤子诊疗领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域。

外泌体作为细胞间信使较早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是直径为30~150nm，密度为1.10~1.18g/ml的细胞外囊泡，携带丰富的遗传信息，参与细胞信号转导、细胞迁移、瘤子新生血管生长和瘤子微环境形成等过程。由于现存的分离技术是基于外泌体的大小、结构和膜蛋白的亲和捕获，比较难完全将其与其他囊泡和大分子蛋白质复合体区分开，分离出的外泌体蛋白浓度通常会被高估，并且不同亚型外泌体之间可能会有不同蛋白质特征，所以对分离的外泌体进行鉴定对于后期研究至关重要。外泌体能够穿过血脑屏障以将特定药物输送到中枢的神经系统是外泌体递送药物的一个明显优势。外周血外泌体提取试剂盒方法

超离法是较常用的外泌体纯化手段。干细胞外泌体Dir

外泌体的提取分离方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等，因此发表文章时易受质疑。2、试剂盒提取：近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分，有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化，也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。干细胞外泌体Dir

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