细胞外囊泡与外泌体

Exosome，中文名外泌体，是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-100nm。尽管外泌体较初在1983年就被发现，但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而较近几年，人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。2015年，随着精确医学概念的提出，越来越多的人开始关注如何能做到疾病的精确诊断和诊疗。外泌体作为一个新型的研究热点，由于它在体内存在的普遍性和获取的便捷性，已经成为了疾病诊断诊疗的潜在有效方式，在精确医学发展上有着光明的前景。外泌体的提取的方式：超速离心法。外泌体可由间充质干细胞、淋巴细胞和肿细胞细胞等多种类型细胞主动分泌释放。细胞外囊泡与外泌体

外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡，其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。外泌体普遍存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同时也存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。所有的细胞都能分泌外泌体，但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量上还是在内含物中都具有比较大的差异性，这也决定了每种外泌体所行使的功能不一样。外泌体普遍参与细胞间物质运输与信息传递，调控细胞生理活动。同时，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进瘤子发生和转移等作用；此外，外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。外周血外泌体提取试剂盒价格外泌体内容物的进入或外泌体信号的诱导可能涉及配体受体诱导的细胞内信号或融合。

AFC自动收集器是将qEV分离法这一过程自动化的仪器，将用来收集外泌体样本的微量离心管放置在AFC的中间转盘内，根据称重精确测量流体体积，可精确的测量到样品中每一个液滴的重量并精确测量总重量。将在空隙体积之前从qEV柱洗脱的流体收集到AFC转盘的单独中心孔中并送至废液桶，避免将不需要的空隙部分收集到微量离心管中。在提取期间，当达到设定的提取体积后，转盘会自动旋转到下一个微量离心管继续收集，到收集完成后自动停止。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率，而且由于采用微滴计数的方法进行定量，可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值，对所测样品中的核酸分子进行一定定量。

外泌体生物学功能：1、在心血管系统中，据报道，源自人胚胎干细胞（ESC）的间充质干细胞（MSC）外泌体可减少小鼠和猪模型中的心肌缺血和再灌注损伤；2、在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制；3、在中枢的神经系统（CNS）中，外泌体的作用是消除废物并介导大脑活动，从而阻止神经退行性疾病的发病机理；迄今为止，尚未完全发现调节外泌体-细胞结合的途径。然而，比较明显，其结合过程从外泌体识别受体细胞PM上的特定受体开始。膜受体的识别是外泌体细胞反应的基础，它可能活跃受体并随后导致相关信号通路的活跃，外泌体与PM融合或外泌体的内吞作用，从而导致蛋白质和RNA直接释放到受体细胞中。从研究上来讲并不太严格区分外泌体或微泡。外泌体作为核酸的药物递送载体。

外泌体研究背景：胞外囊泡是从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的具有双层膜结构的囊泡状小体，主要由微囊泡、凋亡小体、外泌体组成。而外泌体是其中一类小囊泡，直径为30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可携带核酸、蛋白质质和脂质等，存在于血液、唾液、尿液等多种体液中。越来越多的研究证实，外泌体可以通过细胞间转移核酸、蛋白质、脂质等特定物质，发挥特殊的功能。如在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、肿细胞细胞发生了发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体，通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成。细胞外泌体提取试剂盒应用

通过临床数据分析显示外泌体整合素可作为预测肿细胞转移的部位倾向性的诊断指标。细胞外囊泡与外泌体

免疫印迹或蛋白质印迹是分析外泌体较常用的方法之一，其原理是外泌体上特异性抗原与抗体结合。首先对样品进行处理将囊泡裂解并将蛋白质变性，变性后，通过SDS-PAGE分离蛋白质，然后将其转移到硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于针对目的抗原的抗体中。抗体特异性识别膜表面上的抗原，然后将膜暴露于第二抗体中。通过二抗的荧光标签或与二抗偶联的辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶基团进行检测。常用的标记蛋白为CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特异性和重复性会受到所用抗体质量的限制。细胞外囊泡与外泌体

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