南京神经生物学膜片钳电生理技术哪家好

膜片钳实验中电极制备之分两次拉制，首先次拉长7～10mm，直径小于200μm，在此基础上进行第二次拉制，较终使尖锐端的直径为1～2μm，两步拉制的目的主要是使电极前端的锥度变大，狭窄部长度缩短，因此可降低电极的串联电阻，也可减少全细胞记录时的电极液透析时间。由于膜片微电极较忌沾染灰尘和脏物，更忌触碰尖锐端附近部位，所以一般要求在使用前制作。抛光：将电极固定于显微镜工作台上，在镜下将尖锐端靠近加热丝，当通电加热时，可见电极尖锐端微微回缩，此时电极变得光滑，且尖锐端的杂质烧去，得到较干净的表面。从而有利于和细胞膜紧密封接，并在封接后更易保持稳定。膜片钳使用操作流程及注意事项：凡是在本平台使用仪器的同学必须履行实验室相关要求。南京神经生物学膜片钳电生理技术哪家好

膜片钳使用的注意事项：工作原理膜片钳是一种能够直接观察单一的离子通道蛋白质分子对相应离子通透难易程度等特性的一种实验技术。它的基本原理是以一个光洁，直径约为0.5~3um的玻璃微电极同神经或肌细胞的膜接触，之后对微电极另一端开口处施加适当的负压用电极的纤细开口将与电极接触的那一小片膜轻度吸入，如此在微电极开口处的玻璃边沿以及这一小片膜周边会形成紧密的封接，它的电阻能够达到数个或数十个千兆欧，这世界上就是在化学上完全隔离了吸附在微电极开口处的那一片膜同膜的其余部分，通过微电极记录到的电流变化光光和该膜片中通道分子的功能状态相关联。南京细胞生物学脑片膜片钳服务膜片钳技术的应用范围：对单细胞形态与功能关系的研究。

膜片钳电生理技术服务的数据如何处理：1.内面向外式膜片细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内和第二信使与通道的调节作用。2.外面向外式膜片能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。膜片钳的数据如何处理：细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。

膜片钳记录的几种形式：细胞吸附膜片(cell-attached patch)　将两次拉制后经加热抛光的微管电极置于清洁的细胞膜表面上，形成高阻封接，在细胞膜表面隔离出一小片膜，既而通过微管电极对膜片进行电压钳制，高分辨测量膜电流，称为细胞贴附膜片。由于不破坏细胞的完整性，这种方式又称为细胞膜上的膜片记录。此时跨膜电位由玻管固定电位和细胞电位决定。因此，为测定膜片两侧的电位，需测定细胞膜电位并从该电位减去玻管电位。从膜片的通道活动看，这种形式的膜片是极稳定的，因细胞骨架及有关代谢过程是完整的，所受的干扰小。全自动膜片钳系统技术指标：操作简单，全过程可自动化。

膜片钳技术操作方法：实验前准备:打开总电源及稳压电源，打开电脑、放大器，并开启程序软件，新建数据文档并准备开始试验;用P97微电极拉制仪拉制玻璃电极若干备用;检查减震台的减震效果，打开倒置显微镜，监视器和微操备用，取-血细胞将其中玻片取出放入小培美血中，置于倒置显微镜下，于低倍镜下寻找状态良好的细胞，并转入高倍镜下再次确认细胞状态及贴壁情况等，确认细胞后，取电极一根充灌电极内液，弹出气泡，然后套入银丝并插入探头中扭紧旋钮，用注射器管道给电极一点点正压，将电极入水，入水后，查案入水电阻，要在4-8M左右的电极才可以使用，通过调节微操，使电极不断向下接近细胞，待电极尖锐端逐渐变清晰并且将要接近细胞时停止向下，然后把电极移到细胞上方调节放大器上的调零旋钮以保证基线在零水平。膜片钳技术的应用范围：在神经科学中的研究。无锡药理学膜片钳实验研究方案

膜片钳使用操作注意：电热加热线温度很高，在使用时注意避免烫伤。南京神经生物学膜片钳电生理技术哪家好

膜片钳实验常见问题及解决方法：膜片钳技术是电生理记录的常用手段，目前在科学研究中使用越来越普遍。但在具体膜片钳实验操作的过程中，总会遇到各种各样的问题，对实验人员造成很多困扰。本次讲座主要从实验角度出发，以简单，实用的原则，着重讲解实验中遇到的各种问题，以及解决方法。从选择实验样本开始，按照一般实验进行的顺序，逐步延伸，一直到如何搭建自己个性化的膜片钳系统，使大家对膜片钳的基础知识以及膜片钳实验中遇到的各种典型问题及解决办法有系统的了解。南京神经生物学膜片钳电生理技术哪家好

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