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PCR的反应条件：dNTP浓度过高会加快反应速度，但同时还可以增加碱基的错误掺入率。引物浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增。TaqDNA聚合酶浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增，低则合成产物量减少。TaqDNA聚合酶无校正功能，掺入错误率达2*E-4个核苷酸，一个30个循环的扩增反应0.1%-0.25%总错误率。在90～95度下可使整个基因组的DNA变性为单链。一般94～95度30～60s。时间过长使TaqDNA聚合酶失活和dNTP破坏增多。DNA很快冷却到40～60度使引物和模板结合。引物长度在15～25时退火温度。逆转录-聚合酶链反应较广用于表达谱，以确定基因的表达或鉴定RNA转录物的序列。珠海细胞荧光定量PCR供应商

聚合酶链式反应准备：引物内部不应出现互补序列。两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。引物3‘端的碱基，特别是很末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，很好选择是G和C。引物的5′端可以修饰。如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。广州细胞PCR检测技术热启动聚合酶链式反应可以通过将反应组分加热到变性温度在加入聚合酶之前。

聚合酶链式反应的常见问题：出现非特异性扩增带：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引 物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。

聚合酶链反应：流聚合酶链反应:一种伪等温PCR方法。将溶液置于热梯度下，而不是反复加热和冷却聚合酶链反应混合物。由此产生的热不稳定性驱动对流流动自动将聚合酶链反应试剂从热区域和冷区域打乱，从而反复启动聚合酶链反应。通过利用混沌流场的出现，可以优化热边界条件和PCR外壳的几何形状等参数，以产生特异和快速的PCR。这种对流聚合酶链反应设置明显降低了设备功率需求和操作时间。逆转录聚合酶链反应(逆转录-聚合酶链反应):用于从RNA中扩增DNA。逆转录酶将核糖核酸逆转录成cDNA ，然后通过聚合酶链反应进行扩增。逆转录-聚合酶链反应较广用于表达谱，以确定基因的表达或鉴定RNA转录物的序列，包括转录起始和终止位点。如果基因的基因组DNA序列是已知的，逆转录-聚合酶链反应可以用来绘制基因中外显子和内含子的位置。基因的5’端(对应于转录起始位点)通常通过 RACE-PCR (快速扩增cDNA末端)中。聚合酶链反应可以选择这些突变来理解蛋白质是如何完成其功能的，并改变或改善蛋白质功能。

聚合酶链反应有许多优点。它很容易理解和使用，并迅速产生结果。这项技术非常敏感，有可能产生数百万到数十亿份特定产品的拷贝，用于测序、克隆和分析。qRT-PCR具有与PCR相同的优点，同时还具有定量合成产物的优点。因此，它可以用于分析病症、微生物或其他疾病状态中基因表达水平的变化。聚合酶链反应是一种非常强大和实用的研究工具。许多疾病的未知病因的测序正在通过聚合酶链反应得到解决。这项技术可以帮助我们识别与已知病毒相关的未知病毒序列，从而让我们更好地了解疾病本身。如果该过程可以进一步简化，并且可以开发灵敏的非辐射检测系统，PCR将在未来几年在临床实验室中占据明显地位。许多疾病的未知病因的测序正在通过聚合酶链反应得到解决。深圳实时Real-time PCR供应商

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聚合酶链式反应是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。工具/原料：扩增缓冲液，四种dNTP，引物，模板DNA，Taq DNA聚合酶， Mg离子，蒸馏水。模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。珠海细胞荧光定量PCR供应商